尼克·弗瑞（nick fury）：神盾局前局长，10级特工，也被称为33级官员。电影《美国队长2》中解散神盾局，并在《神盾局特工》第一季最终集将局长一职交予科尔森（但是不表明弗瑞隐退，科尔森可能只是代理）。并于复联2中重出江湖，但暂未有接回局长一职的意向
黑**/娜塔莎·罗曼诺夫（black widow/natasha romanoff）：前克格勃特工，基因改造者，衰老缓慢，漫画中为神盾局10级特工，电影设定为7级特工。菲尔·科尔森（phil coulson）：神盾局新任局长，曾经的8级特工。美国特工的样板，具有极强的组织能力和行动力。一个充满超级英雄的宇宙里的普通人。是美国队长的超级粉丝。在纽约之战中被洛基杀死，后被尼克·弗瑞用塔希提计划（菲尔·科尔森在被杀死前就是塔希提计划的负责人，后退出）治疗复活，并修改了记忆（在克里人血清提取物的影响下，现已找回）。《神盾局特工》第一季最终集，科尔森接任神盾局局长。于神盾特工第二季中取消了神盾局的特工等级制度。玛丽亚·希尔（maria hill）：空中战舰指挥官，9级特工，《美国队长2》神盾局解散后任职斯塔克工业。鹰眼/克林特·巴顿（clint barton）：神盾资深特工，了解组织的许多秘密，善于射箭，漫画中为神盾局8级特工，电影为7级特工。仿声鸟/芭芭拉·莫尔斯（barbara morse）：曾经代号为19号特工，尼克·弗瑞的左膀右臂。超级女战士，善使一对武棍。漫画中为神盾局6级特工，其前夫为鹰眼，电视剧中等级未表，前夫为兰斯·亨特。rick stoner（里克·斯托纳上校）：最早出场，被hydra组织**
达姆弹·杜根（timothy dum dum dugan）：曾经是咆哮突击队下士，漫画中为8级特工。g.w.bridge：曾担任局长，与惩罚者和变种人佣兵链索熟识，菲尔·科尔森的创作原型。莎伦·卡特/13号特工（sharon carter/agent 13）：美国队长的联络官和恋人，13号特工，被局长安排在rogers身边暗中保护他。漫画中为佩姬·卡特的侄女，9级特工，电影等级未表。钢铁侠/托尼·史塔克（iron man/tony stark）：因为拥有各式各样的战衣而闻名世界的亿万富翁，同时是神盾局创始人霍华德·史塔克的儿子
norman o**orn（诺曼·奥斯本/绿魔）：蜘蛛侠的敌人以及蜘蛛侠好朋友哈利的父亲，后被章鱼博士注入变异激素变成绿魔。解散了 s.h.i.e.l.d.，成立 h.a.m.m.e.r
33号特工（kara lynn pa**s/agent 33）：招募复仇者的大力神海格力斯（hercules）对抗战神阿瑞斯（ares）和他的手下warhawks，在电视剧中被九头蛇**并招募，怀特霍尔被杀死后脱离九头蛇控制，后因妄图杀死仿声鸟并刺杀神盾局的营救小分队。她变成梅琳达·梅的样子被格兰特·沃德杀死，根据之后的储物柜序号，推测agent may可能将会是下一任的33号特工（agent 33）。彼得·本杰明·帕克（peter benjamin parker）：蜘蛛侠彼得·帕克（peter parker）的父亲，彼得年幼时他在任务中被杀。玛丽·帕克（mary fitzpatrick parker）：蜘蛛侠彼得·帕克（peter parker）的母亲，在任务中被杀。亚历山大·皮尔斯（alexander goodwin pierce）：电影中为九头蛇在神盾局的头目，漫画中为尼克·弗瑞的救护员兼保镖。邮政先生（mr.postal）：生化电子特工的协调员
clay quartermain：曾经是猎杀hulkbusters行动的联络官。监督着nick fury
howling commandos（嚎叫突击队/咆哮突击队）：，怪物集团，除了blade之外成员均为8级特工。上校迈克尔“米奇”罗西（col.michael mickey rossi）：carol danvers（惊奇女士ms.marvel）的旧情人。西蒙（simon）：母舰通讯员
杰拉德“硅”西姆斯（gerald silcon simms）：精英特工，手臂液态金属化
阿列克谢·雅辛（alexei vashin）：前克格勃超人类事务专家
温德尔·沃恩（wendell vaughn）/类星体（quasar）：得到量子手带，成为超级英雄
卡利·弗里斯（kali vries）：渗透进 s.t.a.r.s.
史蒂芬·郭（steven·guo）：神盾局5级特工，优秀的少年特工，潜伏在**，执行秘密任务。塞斯·沃特斯（seth waters）：华盛顿局长官
看守（warden）：领导esp
指挥官乔纳斯·威廉姆斯（commander jonas williams）：带领别动队逮捕了擅离职守特工
山姆·威尔逊/猎鹰（sam wilson/falcon）：复仇者成员
吉米·吴（jimmy woo）：前fbi特工，对抗过黄爪，追猎过哥斯拉，漫画中为8级特工，电视剧中其名字出现在《神盾局特工》第二季第4集里，梅的手机通讯录中。阿特拉斯代理（agents of atlas）：阿特拉斯特工队的首领
拉里·扬（larry young）：空中骑兵军官
梅琳达·梅：在神盾局特工中出现，是科尔森的得力助手，9级特工，受尼克·弗瑞指令潜伏在coulson身边观察他。华裔，拥有极强的格斗术，擅长飞行，外号“铁骑”。斯凯/黛西·约翰逊/震波女（skye/da**y johnson/quake）：在电视剧中曾是涨潮组织成员，在神盾局特工中出现，黑客，漫威超级英雄震波女，漫画中由于异父亲的基因遗传,导致黛西天生就有制造震荡波的超能力，不过并非变种人，其为神盾10级特工，电视剧中则为特批加入的1级特工，超能力来自其母亲而非漫画中的父亲。格兰特·沃德：法国人，7级特工，在神盾局特工中被科尔森调至队伍，格斗术极强，**法十分精准。**为九头蛇成员“千里眼”（约翰·加勒特）安排在神盾局内部的潜伏**。里奥·菲兹：5级，神盾局特工中出现，是科尔森小队中的科学家和工程师，与珍玛·西蒙斯互为密友。珍玛·西蒙斯：5级，在神盾局特工出现，是科尔森小队的生物学家和**师，与里奥·菲兹互为密友。