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    组织分离法,通常是指从子实体中分离获取菌丝的快速、简单易行方法。银耳组织分离有两种方式:一是从耳片中分离菌肉块萌发菌丝;另一种是从白毛团直接分离菌丝。均能获得菌种。下面分别介绍操作方法:
    (1)耳片分离法
    ①挑选种耳。在封闭、无杂菌专门用于分离挑选的银耳子实体中,选取白毛团健壮、丰满,子实体原基块形成早,出耳早,子实体朵形圆整,耳片肥厚,叶片粗花、色泽洁白的作为分离材料。也可以从银耳栽培群体中,选择符合标准种耳条件的子实体,作为分离材料。②剪耳入瓶。在接种箱中,将子实体剪取1厘米见方(小指甲大)的小耳片,置于无菌水中冲洗或用酒精擦拭耳片表面,再用纱布吸干水分后,接入预先灭菌好的瓶装木屑培养基上,让孢子萌发菌丝。一次接种30瓶以上,以供筛选。③诱孢萌发。耳片接入后置于23~24℃下培养,并逐日观察,发现杂菌污染的,立即淘汰。待孢子散落在培养基上,萌发成白色芽孢后取出耳片,塞好瓶口棉花。一般从耳片入瓶到芽孢出现需10~15天。当原有种耳部位出现小米粒大的白毛团后用接种针勾取其中洁白、圆满的1粒,移接到木屑种培养基上,在22~24℃下,继续培养30~35天。选其中耳友菌丝长势旺盛,分泌黑色素均匀,白毛团胶质化快,原基健壮、出耳早、朵型圆整的子实体,待其长至拇指或乒乓球大时,即成木屑一级种。(2)单团分离法
    单团分离法速度快,可在短期内生产出大量菌种;但只能一次性使用,如若反复使用容易引起耳友菌丝退化,影响产量。具体操作如下:
    ①选材。在菌种室内选取性状符合商品性生产的菌种,其菌龄10天左右,作为分离材料。要求培养基表层菌丝生长健壮、白毛团圆满结实;培养基内耳友菌丝生长旺盛,分泌黑色花纹清晰,无杂菌污染,无虫害的原种。②移接。把选定的原种搬入接种箱内,打开瓶口棉塞,在众多的白毛团中,认真瞄准理想的一个,用接种针勾取单个白毛团,迅速移接到琼脂培养基或木屑培养基表面,每支试管或菌种瓶移接1粒。一次移接40~50支或瓶,便于筛选。③培养。接种后在22~24℃下,经10~15天培养和观察,待耳友菌丝蔓延斜面,白毛团周围出现淡黄色水珠,继而形成碎米状原基时,即为琼脂一级种。接种在木屑菌种瓶培养基上的白毛团,一般经培养30~35天,子实体出现拇指大时,选优即成木屑一级种。

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